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液相色譜柱的“不凡”,你知道多少?



色譜柱在液相系統中起著分離的作用,是液相色譜系統的核心部件之一。柱管材質有玻璃、不銹鋼、鋁銅、peek以及內襯光滑的聚合材料的其他材質。一般細粒度的填料采用勻漿填充法裝柱,先將填料調成勻漿,在高壓泵作用下,快速將其壓入裝有洗脫液的色譜柱內,經沖洗后備用。


上學的時候也裝過層析柱,由于技術不過關,裝出來的柱子里面經常有氣泡,實驗效果不好。柱子裝填的效果對柱效影響很大。如何使用色譜柱使實驗順利進行,這就需要對色譜柱做一下深入的了解了。

一般的液相色譜柱由柱管、柱頭螺母、死堵、篩板、還有里面的填料組成。不同品牌的構造略有不

柱的分類2液相色譜柱分類多樣主要有以下分類方式

按照固定相基質分:

無機氧化物(常用硅膠、氧化鋁)、聚合物基質(常用DVB、PS-DVB、PHAM等)和全石墨化碳色譜柱等。


按結構和形狀分:

全多孔硅膠柱和核殼柱,無定型和球形,整體柱。


按分離模式分:

正相、反相、離子交換、體積排阻、親和、手性等。


按照分離規模和色譜柱尺寸分:

制備柱、分析柱、微型柱、毛細管柱等。


色譜柱的類型和構型(粒徑、內徑、長度、碳載量、孔徑等)選擇通常有分離的目的決定,對特定類型的色譜柱,不同品牌不同系列之間差異很大。


表征色譜柱性能的參數主要有:理論塔板數、不對稱因子、對兩種不同溶質的選擇性、色譜柱的反壓、保留時間的重現性、鍵和相濃度、色譜柱的穩定性等。一般色譜柱出廠COA報告包含其中比較關鍵的項目。


我們常見的色譜柱品牌有waters、安捷倫、賽默飛、島津、shodex、大賽璐、還有被大曹三耀收購的資生堂,國內品牌比較出名的就是月旭、依利特了。


我們再看看各種各樣的鍵和相都是啥

這么多的鍵和相到底應該怎么選,有沒有規律呢,必須有啊,往下瞅瞅~


又想起了化學老師那句萬能的箴言:“結構決定性質,性質決定用途?!苯Y構和性質還決定了這伙計需要用什么柱子分離。


了解被分離物有何區別?有無可電離集團?電離常數?PH如何影響色譜分析?比如下圖PH對分離的影響。


常規的硅膠基質色譜柱不能耐受高PH,可以選擇雜化硅膠顆?;蛘呔酆衔锘|的色譜柱,多點鍵和的色譜柱在高PH下也會比單點鍵和的色譜柱壽命更長。下圖便是某位小姐姐家的色譜柱在高PH下硅膠溶解的圖片。


1、拿到色譜柱后先閱讀說明書,了解色譜柱的具體性能:耐受溫度、耐受PH等。以及色譜柱的沖洗和保存條件。經過柱校測試確認色譜柱本身沒有問題后方可正常使用。


2、樣品充分前處理,確保樣品的潔凈;使用保護柱或在線過濾器,根據實際情況更換保護柱芯或濾片。


3、避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。


4、應逐漸改變溶劑的組成,特別是反相色譜中如果流動相中使用了緩沖鹽,避免出現鹽析。


5、選擇使用適宜的流動相(尤其是PH),以避免固定相被破壞,PH過低共價鍵斷裂,鍵和相水解;PH過高硅膠溶解。


6、色譜柱使用過程中,如果壓力升高,或出現污染,選擇適當的條件沖洗或反沖。

 

適用于C18、C8、C4、C1、苯基、PFP、AQ等

使用至少20倍柱體積的含有≥30%誰的極性郵寄溶劑(如乙腈)作為流動相除去柱子中的緩沖鹽;使用至少20倍柱體積的含有95%極性郵寄溶劑(如乙腈)沖洗色譜柱。


污染物的去除常規星期后柱校沒有明顯恢復時,使用50%異丙醇/乙腈以低流速清洗20倍柱體積以除去污染物。(以上操作可根據實驗室自身SOP視情況而定,此方法僅為賽默飛針對自己品牌的反相色譜柱沖洗的參考意見)


適用于氨基柱、氰基柱

常規清洗:乙腈:水=60:40條件對色譜柱進行沖洗,清洗時不建議水相比例超過40%,過高使用水相容易導致鍵和相水解。


色譜柱再生:當色譜柱經過長期使用,柱校降低時,可以對色譜柱進行再生,乙腈:水(水中加入0.05%氨水)=60:40條件沖洗30倍柱體積。(以上操作可根據實驗室自身SOP視情況而定,此方法僅為賽默飛針對自己品牌的色譜柱沖洗的參考意見)

 

適用于離子交換柱SCX、SAX沖洗方法

日常沖洗:用100%水沖洗30個柱體積除鹽,然后用20%甲醇或乙腈沖洗20個柱體積后保存在20%甲醇或乙腈中。


長期保存:用100%水沖洗30個柱體積去除鹽,然后用50%乙腈;50%水沖洗20個柱體積后保存在50%乙腈:50%水中。


再生:先用高濃度的緩沖鹽(不超過1M),然后再用100%水洗,100%乙腈或甲醇沖洗,再用20%乙腈或甲醇保存。(以上操作可根據實驗室自身SOP視情況而定,此方法僅為賽默飛針對自己品牌的色譜柱沖洗的參考意見)



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